細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
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細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。2.了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測方法
二、實(shí)驗(yàn)原理：
1、細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。
3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
細(xì)胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；
2、取骨髓細(xì)胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上；
3、涂片：用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個方向涂布推開，室溫晾干；
4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。吖啶橙染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析：
1、根據(jù)隨機(jī)選擇的幾個視野的統(tǒng)計(jì)，該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela細(xì)胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）
五、思考題：
1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制
細(xì)胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動自殺過程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
2、細(xì)胞凋亡的特征
凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細(xì)胞凋亡的方法
定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）
定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、通過對原核和真核各種形態(tài)細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡觀察，了解細(xì)胞的`形態(tài)及其顯微結(jié)構(gòu)；
2、學(xué)習(xí)顯微測量的方法，對細(xì)胞的大小有一直觀認(rèn)識。
二、實(shí)驗(yàn)材料和儀器：
小白鼠肝細(xì)胞切片；雞血紅細(xì)胞；蠶豆葉片橫切片；
普通光學(xué)顯微鏡；目鏡測微尺；鏡臺測微尺；載玻片；蓋玻片。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
(一)細(xì)胞形態(tài)觀察
l、動物細(xì)胞的觀察
（1）人肝細(xì)胞切片：在顯微鏡下仔細(xì)觀察肝細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)造。
（2）雞血細(xì)胞涂片的觀察：觀察血細(xì)胞的組成；紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的形態(tài)特點(diǎn)。
2、植物細(xì)胞的觀察
取蠶豆葉片橫切片的觀察：注意表皮細(xì)胞和葉肉細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)。
（二）細(xì)胞的大小和測量
1、卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺刻度向下裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。
2、將鏡臺測微尺刻度向上放在鏡臺上夾好，使測微尺分度位于視野中央。調(diào)焦至能看清鏡臺測微尺的分度。
3、小心移動鏡臺測微尺和轉(zhuǎn)動目鏡測微尺(如目鏡測微尺分度模糊，可轉(zhuǎn)動目鏡上透鏡進(jìn)行調(diào)焦)，使兩尺左邊的一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重合的直線。
4、記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。按下式計(jì)算目鏡測微尺每格等于多少μm：
鏡臺測微尺的格數(shù)
目鏡測微尺每格的微米數(shù)=————————— × 10
目鏡測微尺的格數(shù)
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、目鏡校正：40倍顯微鏡目鏡測微尺每格的微米數(shù)=17/70=0.24
2、細(xì)胞大小的測量：
五、作業(yè)與思考：
1、血細(xì)胞按含量高低，主要含有：紅細(xì)胞，白細(xì)胞，血小板。
白細(xì)胞最大，紅細(xì)胞次之，血小板最小。紅細(xì)胞：主要的功能是運(yùn)送氧。 白細(xì)胞：主要扮演了免疫的角色，當(dāng)病菌侵入人體時，白細(xì)胞能穿過毛細(xì)血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍，吞噬。血小板：止血過程中起著重要作用。細(xì)胞形態(tài)見下圖。
2、植物細(xì)胞一般比動物細(xì)胞大一些。形態(tài)圖見下。
3、在不同放大倍數(shù)下，測定的細(xì)胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍數(shù)越大，在視野中同等實(shí)際距離下的兩點(diǎn)視野距離更大，而更容易測量準(zhǔn)確。
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